乙型肝炎病毒前C区变异检测
| 乙型肝炎病毒前C区变异检测 | ||||||||||||||||
| INNO-LiPA HBV PreCore | ||||||||||||||||
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一、临床背景
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乙型肝炎病毒，即HBV，为嗜肝DNA病毒。完整的HBV颗粒又名Dane颗粒，分为包膜与核心两部分。HBV的抵抗力很强，能耐受60℃ 4小时及一般浓度的消毒剂。据调查我国有一亿两千万人口为HBV携带者，其中约10%可发展为慢性肝炎。慢性患者和病毒隐性携带者是乙型肝炎的主要传染源，其传染性贯穿于整个病程，传播途径主要为血液、体液及母婴，易感人群为新生儿及成人。HBV通过皮肤、粘膜进入机体后，迅速通过血流到达肝和其它器官。乙肝的组织损伤主要由于机体的免疫应答所致。临床上以疲乏、食欲减退、肝肿大、肝功能异常为主要表现。治疗乙肝的主要药物有拉咪夫啶、干扰素等。
当乙型肝炎病毒BCP区以及前C区28位密码子发生变异时，会减少一种靶抗原，使感染持续，且HBeAg的免疫耐性消失，肝内炎症被激活。临床研究发现，HBV前C区变异的患者，其发生重症肝炎、肝细胞癌的几率不同，对干扰素治疗的反应性以及对拉米夫啶耐药的发生率也不相同。因此，对乙型肝炎病毒前C区变异的研究、检测，为乙型肝炎的研究及治疗方法的确定，具有重要的参考价值和深远的临床意义。
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二、试剂用途
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INNO-LiPA HBV PreCore试剂盒基于反向探针杂交的原理，检测乙型肝炎病毒C基本启动子（BCP）区nt1762（A→T）和nt1764（G→A/T）以及前C区28位密码子（TGG→TAG）的核苷酸多态性。这些变异可使HBeAg缺失。
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三、检测方法及原理
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INNO-LiPA HBV PreCore基于反向探针杂交的原理。生物素标记的BCP区和PreCore区DNA扩增产物，与以平行线形式标记在薄膜检测条上的特异性寡核苷酸探针杂交。杂交后，未能杂交的DNA从检测条上被洗脱。加入标记有碱性磷酸酶的链霉抗生物素蛋白（链亲和素），与杂交产物上标记的生物素结合。随后加入BCIP/NBT显色底物, 显现紫色/棕色。
对DNA的扩增应使用 INNO-LiPA HBV PreCore扩增试剂盒。
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四、检测特点
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1. 高敏感性，可同时检测前C区及C基本启动子区的变异。
2. 检测条上包括1条棕色标记线，2条对照线，7条平行探针线。
3. 酶标记物对照线是显色反应的对照；扩增反应对照线包括通用HBV探针，以检测扩增的
HBV产物的存在。
4. 检测时间短，操作简单，并可手工操作；
5. 可用肉眼直接判定结果；
6. 便于质控和标准化操作；
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五、检测步骤及时间
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※ 扩增后总检测时间2小时30分钟。
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