乙型肝炎病毒基因分型检测
| 乙型肝炎病毒基因分型检测 | ||||||||||||||||
| INNO-LiPA HBV Genotyping | ||||||||||||||||
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一、临床背景
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乙型肝炎病毒，即HBV，为嗜肝DNA病毒。完整的HBV颗粒又名Dane颗粒，分为包膜与核心两部分。HBV的抵抗力很强，能耐受60℃ 4小时及一般浓度的消毒剂。据调查，我国有一亿两千万人口为HBV携带者，其中约10%可发展为慢性肝炎。慢性患者和病毒隐性携带者是乙型肝炎的主要传染源，其传染性贯穿于整个病程，传播途径主要为血液、体液及母婴，易感人群为新生儿及成人。HBV通过皮肤、粘膜进入机体后，迅速通过血流到达肝和其它器官。乙肝的组织损伤主要由于机体的免疫应答所致。临床上以疲乏、食欲减退、肝肿大、肝功能异常为主要表现。治疗乙肝的主要药物有拉咪夫啶、干扰素等。
研究表明，乙型肝炎基因型不同的患者，其e抗原的血清转阴率是不同的，其发生慢性肝硬化的比率也是不同。此外，不同基因型的患者对干扰素的反应不同，对拉米夫定产生耐药的几率也不相同。因此，对乙型肝炎病毒基因型的研究、检测，为乙型肝炎的诊断及治疗方法的确定，具有重要的参考价植、深远的临床意义。
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二、试剂用途
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INNO-LiPA HBV Genotyping 检测是一种线性探针检测方法，通过检测HBV聚合酶基因的B和C中的型特异性基因序列，来确定乙型肝炎病毒 A、B、C、D、E、F、G、H 八种基因型及混合基因型。
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三、检测方法及原理
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INNO-LiPA HBV Genotyping是基于反向探针杂交的原理。来自于HBsAg开放读码框的生物素标记的DNA扩增产物，与以平行线形式固定在薄膜检测条上的特异性寡核苷酸探针杂交。杂交后，未能杂交的DNA从检测条上被洗脱。 加入标记有碱性磷酸酶的链霉抗生物素蛋白（链亲和素），与杂交产物上标记的生物素结合。随后加入BCIP/NBT显色底物，显现紫色/棕色。
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| 对HBV不同基因区扩增应使用INNO-LiPA HBV特异性扩增引物。 | ||||||||||||||||
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四、检测特点
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1. 高敏感性，可检测A到H各种基因亚型及混合型。
2. INNO-LiPA HBV Genotyping (RUO，80070)，只用一次PCR扩增，检测时间大大缩短。
3. 检测条上包括一个红色标记线，2个对照线，14个平行探针线。
4. 酶标记物对照线是显色反应的对照；扩增反应对照线包括通用HBV探针，以检测扩增的HBV产物的存在。
5. 检测时间短，操作简单，可手工操作。
6. 可用肉眼直接判定结果。
7. 重复性好，便于质控和标准化操作。
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五、检测步骤及时间
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| ※ 扩增后总检测时间2小时30分钟。 | ||||||||||||||||