人类乳头状瘤病毒基因分型检测
人类乳头状瘤病毒基因分型检测 | ||||||||||||
INNO-LiPA HPV Genotyping | ||||||||||||
一、临床背景
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人类乳头状瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)是一种嗜上皮性病毒,在人和动物中分布广泛,有高度的特异性,长期以来,已知HPV可引起人类良性的肿瘤和疣,如生长在生殖器官附近皮肤和粘膜上的人类寻常疣、尖锐湿疣以及生长在粘膜上的乳头状瘤。自从1976年zur Hansen提出HPV可能是性传播致癌因素以来,HPV感染与宫颈癌关系的研究成为肿瘤病毒病因研究的热门课题。
HPV是一组病毒的总称,组成一个科,其病毒形态类似,但DNA限制性内切酶图谱各异,核壳体蛋白质的抗原性不同。目前已经确定的HPV型别大约有80余种,依其感染的上皮所在部位分为皮肤型HPV和生殖道上皮HPV,大约35种型别可感染妇女生殖道,约20多种与肿瘤相关。依据不同型别HPV与肿瘤发生的危险性高低分为低度危险性型HPV和高度危险性型HPV。低度危险性型HPV包括:HPV 6,11,34,40,42,43,44,53,54,70及74等型,常引起外生殖器湿疣等良性病变包括宫颈上皮内低度病变(CIN I)。高度危险性型HPV包括:HPV 16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66及68等型,与宫颈癌及宫颈上皮内高度病变(CIN II/III)的发生相关,尤其是HPV 16和18型。
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二、试剂用途
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INNO-LiPA HPV Genotyping检测是一种线性探针检测方法,可以准确鉴别人类乳头状瘤病毒至少25种相关的人类乳头状瘤病毒基因型。
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三、检测方法及原理
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INNO-LiPA HPV Genotyping是基于反向探针杂交的原理。 通过PCR反应扩增的HPV基因组L1区,与以平行线形式固定在薄膜检测条上的特异性寡核苷酸探针杂交。杂交后, 未能杂交的DNA从检测条上被洗脱。加入标记有碱性磷酸酶的链霉抗生物素蛋白(链亲和素),与杂交产物上标记的生物素结合。随后加入BCIP/NBT显色底物,显现紫色。结果可用肉眼判断。
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四、检测特点
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1. 人类乳头状瘤病毒的各型与其致病危险性有关:
HPV 6,11,34,40,42,43,44,53,54,70及74型被认为是低度危险性型;HPV
16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66及68被认为是高度危险性型
(1)。
2. 可靠鉴别患者的持久HPV感染(2)。
3. 检测监控个别患者的HPV感染(3,4)。
4. 各种HPV型混合感染,在HPV阳性的女性中发生率为25-30%(5);并可增大其发展为颈
部肿瘤的危险性(6,7)。
5. 酶标记物对照线是显色反应的对照,扩增反应对照线包括通用HPV探针以检测扩增的HPV
产物的存在。
6. 与同类检测试剂比较,具有检测时间短,操作简单,结果准确的优点。并可作为确诊试
剂,便于质控和标准化操作。
7. 手工操作,肉眼直观判定结果。
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五、检测步骤及时间
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※扩增后总检测时间2小时30分钟。 | ||||||||||||
参考文献 | ||||||||||||
1. Zur H. Papillomavirus infections-a major cause of human cancers. Biochim
Biophs Acta 1996;1288:F55-F78.
2. Kleter G, et al. A novel short-fragment PCR assay for highly sensitive
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3. Innis B, et al. HPV -16/18 infection prevalence in women screened for a
prophylactic vaccine study in Brazil and North America. 19th Interna-
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O116).
4. Melchers WJ, et al. Short fragment polymerase chain reaction reverse
hybridization line probe assay to detect and genotype a broad a spectrum
of human papillomavirus types. Clinical evaluation and follow-up. Am J
Pathol 1999 Nov;155(5):1473-8.
5. Kleter G,et al. Development and clinical evaluation of a highly sensi-
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6. Morrison E, et al. Human papillomavirus infection and other risk factors
for cervical neoplasia : a case-control study. Int J Cancer 1991;49:6-
13.Van der Graaf Y, et al. Human Papillomavirus and the long-term risk
for cervical neoplasia. Am J Epidem 2002; in press.
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