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乙型肝炎病毒前C区变异检测

  发布日期:2010/11/5 15:18:57   浏览次数:1153
乙型肝炎病毒前C区变异检测
INNO-LiPA HBV PreCore

一、临床背景
乙型肝炎病毒,即HBV,为嗜肝DNA病毒。完整的HBV颗粒又名Dane颗粒,分为包膜与核心两部分。HBV的抵抗力很强,能耐受60℃ 4小时及一般浓度的消毒剂。据调查我国有一亿两千万人口为HBV携带者,其中约10%可发展为慢性肝炎。慢性患者和病毒隐性携带者是乙型肝炎的主要传染源,其传染性贯穿于整个病程,传播途径主要为血液、体液及母婴,易感人群为新生儿及成人。HBV通过皮肤、粘膜进入机体后,迅速通过血流到达肝和其它器官。乙肝的组织损伤主要由于机体的免疫应答所致。临床上以疲乏、食欲减退、肝肿大、肝功能异常为主要表现。治疗乙肝的主要药物有拉咪夫啶、干扰素等。
当乙型肝炎病毒BCP区以及前C区28位密码子发生变异时,会减少一种靶抗原,使感染持续,且HBeAg的免疫耐性消失,肝内炎症被激活。临床研究发现,HBV前C区变异的患者,其发生重症肝炎、肝细胞癌的几率不同,对干扰素治疗的反应性以及对拉米夫啶耐药的发生率也不相同。因此,对乙型肝炎病毒前C区变异的研究、检测,为乙型肝炎的研究及治疗方法的确定,具有重要的参考价值和深远的临床意义。

二、试剂用途
INNO-LiPA HBV PreCore试剂盒基于反向探针杂交的原理,检测乙型肝炎病毒C基本启动子(BCP)区nt1762(A→T)和nt1764(G→A/T)以及前C区28位密码子(TGG→TAG)的核苷酸多态性。这些变异可使HBeAg缺失

三、检测方法及原理
INNO-LiPA HBV PreCore基于反向探针杂交的原理。生物素标记的BCP区和PreCore区DNA扩增产物,与以平行线形式标记在薄膜检测条上的特异性寡核苷酸探针杂交。杂交后,未能杂交的DNA从检测条上被洗脱。加入标记有碱性磷酸酶的链霉抗生物素蛋白(链亲和素),与杂交产物上标记的生物素结合。随后加入BCIP/NBT显色底物, 显现紫色/棕色。
对DNA的扩增应使用 INNO-LiPA  HBV PreCore扩增试剂盒。


四、检测特点
1. 高敏感性,可同时检测前C区及C基本启动子区的变异。
2. 检测条上包括1条棕色标记线,2条对照线,7条平行探针线。
3. 酶标记物对照线是显色反应的对照;扩增反应对照线包括通用HBV探针,以检测扩增的
HBV产物的存在。
4. 检测时间短,操作简单,并可手工操作;
5. 可用肉眼直接判定结果;
6. 便于质控和标准化操作;

五、检测步骤及时间
主 要 步 骤
检 测 时 间
1、杂 交
60 分钟
2、冲 洗
30 分钟
3、显 色
60 分钟
※ 扩增后总检测时间2小时30分钟。

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