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乙型肝炎病毒基因分型检测

  发布日期:2010/11/5 15:18:35   浏览次数:1216
乙型肝炎病毒基因分型检测
INNO-LiPA HBV Genotyping

一、临床背景
乙型肝炎病毒,即HBV,为嗜肝DNA病毒。完整的HBV颗粒又名Dane颗粒,分为包膜与核心两部分。HBV的抵抗力很强,能耐受60℃ 4小时及一般浓度的消毒剂。据调查,我国有一亿两千万人口为HBV携带者,其中约10%可发展为慢性肝炎。慢性患者和病毒隐性携带者是乙型肝炎的主要传染源,其传染性贯穿于整个病程,传播途径主要为血液、体液及母婴,易感人群为新生儿及成人。HBV通过皮肤、粘膜进入机体后,迅速通过血流到达肝和其它器官。乙肝的组织损伤主要由于机体的免疫应答所致。临床上以疲乏、食欲减退、肝肿大、肝功能异常为主要表现。治疗乙肝的主要药物有拉咪夫啶、干扰素等。
研究表明,乙型肝炎基因型不同的患者,其e抗原的血清转阴率是不同的,其发生慢性肝硬化的比率也是不同。此外,不同基因型的患者对干扰素的反应不同,对拉米夫定产生耐药的几率也不相同。因此,对乙型肝炎病毒基因型的研究、检测,为乙型肝炎的诊断及治疗方法的确定,具有重要的参考价植、深远的临床意义。

二、试剂用途
INNO-LiPA HBV Genotyping 检测是一种线性探针检测方法,通过检测HBV聚合酶基因的B和C中的型特异性基因序列,来确定乙型肝炎病毒 A、B、C、D、E、F、G、H 八种基因型及混合基因型。

三、检测方法及原理
INNO-LiPA HBV Genotyping是基于反向探针杂交的原理。来自于HBsAg开放读码框的生物素标记的DNA扩增产物,与以平行线形式固定在薄膜检测条上的特异性寡核苷酸探针杂交。杂交后,未能杂交的DNA从检测条上被洗脱。 加入标记有碱性磷酸酶的链霉抗生物素蛋白(链亲和素),与杂交产物上标记的生物素结合。随后加入BCIP/NBT显色底物,显现紫色/棕色。
对HBV不同基因区扩增应使用INNO-LiPA HBV特异性扩增引物。

四、检测特点
1. 高敏感性,可检测A到H各种基因亚型及混合型。
2. INNO-LiPA HBV Genotyping (RUO,80070),只用一次PCR扩增,检测时间大大缩短。
3. 检测条上包括一个红色标记线,2个对照线,14个平行探针线。
4. 酶标记物对照线是显色反应的对照;扩增反应对照线包括通用HBV探针,以检测扩增的HBV产物的存在。
5. 检测时间短,操作简单,可手工操作。
6. 可用肉眼直接判定结果。
7. 重复性好,便于质控和标准化操作。

五、检测步骤及时间
主 要 步 骤
检 测 时 间
1、变 性
5 分钟
2、杂 交
60分钟
3、冲 洗
30分钟
4、显 色
60分钟
※ 扩增后总检测时间2小时30分钟。

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