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乙型肝炎病毒耐药基因检测 v3

  发布日期:2010/11/5 15:18:11   浏览次数:1181
乙型肝炎病毒耐药基因检测 v3
INNO-LiPA HBV DR v3

一、临床背景
乙型肝炎病毒,即HBV,为嗜肝DNA病毒。完整的HBV颗粒又名Dane颗粒,分为包膜与核心两部分。HBV的抵抗力很强,能耐受60℃ 4小时及一般浓度的消毒剂。据调查,我国有一亿两千万人口为HBV携带者,其中约10%可发展为慢性肝炎。慢性患者和病毒隐性携带者是乙型肝炎的主要传染源,其传染性贯穿于整个病程,传播途径主要为血液、体液及母婴,易感人群为新生儿及成人。HBV通过皮肤、粘膜进入机体后,迅速通过血流到达肝和其它器官。 乙肝的组织损伤主要由于机体的免疫应答所致。临床上以疲乏、食欲减退、肝肿大、肝功能异常为主要表现。
现阶段,有大量的新型抗病毒药物被使用,如 Lamivudine、 Adefovir、 Entecavir、Tenofovi 等。一些研究表明,Lamivudine 用药治疗4年后的耐药性比率为60%;Adefovir用药治疗1年后的耐药性比率为3.5%。 一些 HBV 感染者在接受肝移植手术之后,更容易产生对Adefovir的耐药性。与其他的抗病毒药物一样,Entecavir也会引发病毒变异的避免,从而可能导致病毒的无反应性或者治疗失败,并会对进一步的治疗选择产生局限性。 因此在用药期间,这种突变的早期测定对于病人将来的治疗选择与监控起到了重要作用。

二、试剂用途
INNO-LiPA HBV DR v3采用线性反向探针杂交检测的方法,可同时检测出HBV的野生株,以及与Lamivudine、Adefovir、Entecavir治疗药物有关的HBV耐药基因的突变,即:HBV反转录酶基因B区、C区、D区的野生型或突变型。

三、检测方法及原理
INNO-LiPA HBV DR v2 是基于反向杂交的原理。扩增后的被生物素标记的HBV DNA产物,与平行线形式固定在尼龙膜检测条上的特异性寡核苷酸探针杂交。杂交后,未能杂交的DNA从检测条上被洗脱。随后加入标记有碱性磷酸酶的链霉亲和素,与杂交产物上标记的生物素结合。最后加入BCIP/NBT显色,显现紫色/棕色。从而判断结果。
对HBV逆转录酶编码区B、C、D结构域的扩增,应使用INNO-LiPA HBV DR v3 扩增引物。

四、检测特点

1. 只进行单轮PCR扩增,试剂盒包含生物素标记的特异性扩增引物。

2. 检测条上包括一条标记线,2条对照线及多条与耐药性相关的特异性探针线。

3. 酶标记物对照线是显色反应的对照,扩增反应对照线包括通用HBV探针,以检测扩增的HBV产物的存在。

4. 此类检测条与先前为INNO-LiPA HBV DR v2 试剂盒所研制的含HBV聚合酶A-F区域型单轮PCR 产物完全不冲突。

5. 可以同时检测出乙型肝炎病毒野生株以及与Lamivudine、Adefovir、Entecavir耐药性相关的乙型肝炎病毒基因变异。

耐药基因变异位点
检测的相关药物
rt L 180 M
Lamivudine
rt T 184 S/C/G/A/I/L/F/M
Entecavir
rt A 194 T Tenofovir
rt S 202 G/C/I Entecavir
rt M 204 V/I/S
Lamivudine
rt I 233 V
Adefovir
rt N 236 T
Adefovir
rt M 250 V/I/L
Entecavir
6. 对乙型肝炎病毒混合株的高敏感性
▲ 对随访病历克隆分析证实与LiPA检测的结果相同。
▲ 有助于对乙型肝炎病毒耐药性进行动态分析。
7. 检测准确、快捷,操作简单,可手工操作。
8. 肉眼轻松直观判定结果。
9. 便于质控和标准化操作。

五、检测步骤及时间
主 要 步 骤
检 测 时 间
1、变 性
5 分钟
2、杂 交
60分钟
3、冲 洗
30分钟
4、显 色
60分钟
※ 扩增后总检测时间2小时30分钟

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