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乙型肝炎病毒耐药基因检测 v2

  发布日期:2010/11/5 15:12:09   浏览次数:1645

乙型肝炎病毒耐药基因检测 v2
INNO-LiPA HBV DR v2

一、临床背景
乙型肝炎病毒,即HBV,为嗜肝DNA病毒。完整的HBV颗粒又名Dane颗粒,分为包膜与核心两部分。HBV的抵抗力很强,能耐受60℃ 4小时及一般浓度的消毒剂。据调查,我国有一亿两千万人口为HBV携带者,其中约10%可发展为慢性肝炎。慢性患者和病毒隐性携带者是乙型肝炎的主要传染源,其传染性贯穿于整个病程,传播途径主要为血液、体液及母婴,易感人群为新生儿及成人。HBV通过皮肤、粘膜进入机体后,迅速通过血流到达肝和其它器官。乙肝的组织损伤主要由于机体的免疫应答所致。临床上以疲乏、食欲减退、肝肿大、肝功能异常为主要表现。治疗乙肝的主要药物有Lamivudine、Adefovir、干扰素等。一些研究表明,Lamivudine用药治疗4年后的耐药性比率为60%;Adefovir用药治疗1年后的耐药性比率为3.5%。一些HBV感染者在接受肝移植手术之后,更容易产生对Adefovir的耐药性。

二、试剂用途
INNO-LiPA HBV DR v2 采用线性反向探针杂交检测的方法,可同时检测出HBV的野生株,以及与Lamivudine、Adefovir两种治疗药物有关的HBV耐药基因的突变,即: HBV逆转录酶编码区B、C、D结构域的野生型或突变型。

三、检测方法及原理
INNO-LiPA HBV DR v2 是基于反向杂交的原理。扩增后的被生物素标记的HBV DNA产物,与平行线形式固定在尼龙膜检测条上的特异性寡核苷酸探针杂交。杂交后,未能杂交的DNA从检测条上被洗脱。随后加入标记有碱性磷酸酶的链霉亲和素,与杂交产物上标记的生物素结合。最后加入BCIP/NBT显色,显现紫色/棕色。从而判断结果。
对HBV逆转录酶编码区B、C、D结构域的扩增,应使用INNO-LiPA HBV DR v2 扩增引物。

四、检测特点
1. INNO-LiPA HBV DR v2 试剂盒包含特异性扩增引物,新一代产品只用一次PCR扩增,缩短检测时间,减少检测步骤。
2. 可以同时检测出乙型肝炎病毒野生株以及与Lamivudine、Adefovir耐药性相关的乙型肝炎病毒基因变异。
耐药基因变异位点
检测的相关药物
rt L 80 V/I
Lamivudine
rt V 173 G/L
Lamivudine,Entecavir
rt L 180 M
Lamivudine
rt A 181 T/V
Lamivudine,Adefovir,Entecavir
rt M 204 V/I/S
Lamivudine
rt N 236 T
Adefovir
※rt = reverse transcriptase(逆转录酶)
3. 检测条上包括一条标记线,2条对照线,32条平行探针线。
4. 酶标记物对照线是显色反应的对照,扩增反应对照线包括通用HBV探针,以检测HBV DNA
扩增产物的存在。
5. 对乙型肝炎病毒混合亚型的高敏感性
▲ 对随访病历克隆分析证实与LiPA检测的结果相同。
▲ 有助于对乙型肝炎病毒耐药性进行动态分析。
6. 检测准确、快捷,操作简单,可手工操作。
7. 肉眼轻松直观判定结果。
8. 重复性好,便于质控和标准化操作。

五、检测步骤及时间
主 要 步 骤
检 测 时 间
1、变 性
5 分钟
2、杂 交
60分钟
3、冲 洗
30分钟
4、显 色
60分钟
扩增后总检测时间2小时30分钟

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